今日说精准丨精准医疗视角下的NSCLC:MET基因扩增检测优化策略

作者：中国医学论坛报今日肿瘤
导语

在非小细胞肺癌（NSCLC）的治疗中，MET基因扩增是一个关键的分子标志物。MET基因扩增与肿瘤的侵袭性、晚期临床分期以及不良预后密切相关。临床试验数据也一致表明，对于MET基因扩增的晚期NSCLC患者，MET抑制剂的治疗能够带来显著的临床获益。因此，当前的权威指南均推荐对NSCLC患者进行MET基因扩增的检测，以便于早期诊断并为患者提供个体化的治疗方案。本文将围绕MET基因扩增的检测相关内容展开介绍，与读者共享。

MET基因扩增概述

MET基因扩增是发生在NSCLC中的一个关键分子变异，它指的是MET基因拷贝数（GCN）的增加，主要有局部扩增和多倍体两种形式。局部扩增是指特定区域内MET基因（有时包括其周围的基因区域）的拷贝数出现特异性增加，而染色体上的其他基因拷贝数则保持不变。多倍体则涉及更大规模的染色体变化，即整个染色体或其较大的一部分的拷贝数增加，在这种情况下，不仅仅是MET基因，染色体上的其他基因也可能经历拷贝数的增加。两种形式的MET基因扩增都可能导致MET信使RNA（mRNA）水平的上升，进而增加MET蛋白的表达量，最终导致MET信号通路的异常激活。这种信号通路的异常激活与肿瘤的增殖、侵袭和耐药性有关，因此在NSCLC的治疗中，针对MET基因扩增的检测和治疗具有重要的临床意义。

MET基因扩增检测方法

准确检测MET基因扩增状态对于预测患者对特定MET抑制剂的反应至关重要。目前MET基因扩增检测可通过荧光原位杂交（FISH）、二代测序（NGS）和微滴式数字PCR（ddPCR）这三种方法实现，它们各自具有不同的原理和优势。下文将综述这三种方法的基本原理和优势，并基于2022年《非小细胞肺癌MET临床检测中国专家共识》推荐1，提出MET基因扩增的检测策略。

分子检测技术的原理和优势

荧光原位杂交技术（FISH）：FISH作为检测MET基因扩增的金标准，通过荧光标记的探针与细胞中的MET基因序列进行特异性结合，直接在细胞核内显示基因的物理位置和拷贝数。通过计算肿瘤细胞中MET基因拷贝数（GCN）以及MET荧光信号与7号染色体着丝粒比值（MET/CEP7），FISH能够判断是否存在基因扩增。FISH的优势在于其直观可视化基因拷贝数的能力，准确性和特异性高，结果易于解读，操作流程成熟，有助于快速得出结论，并且能够同时提供基因扩增和染色体异常的信息，为全面了解肿瘤细胞的遗传状态提供重要依据。

二代测序（NGS）：NGS技术通过高通量测序，能够对多个基因的序列变化进行分析。在MET扩增的检测中，NGS利用测序深度和特定位点变异频率等信息计算MET基因的拷贝数变异，并通过算法区分局部扩增和多体性扩增。NGS的优势在于其能够同时检测多个基因的序列变化，提供全面的基因变异信息；深度测序有助于识别低频变异，对早期检测和疾病监测至关重要；算法区分的细致性为诊断和治疗决策提供精确的基因拷贝数变异信息。

微滴式数字PCR（ddPCR）：ddPCR是一种绝对定量的核酸分子检测技术，通过单个微滴中靶基因的扩增和荧光信号分析，直接计算靶基因的拷贝数。尽管ddPCR在MET扩增检测中显示出潜力，但其临床应用前仍需进一步优化和验证。ddPCR的优势在于提供绝对定量的基因拷贝数检测，无需标准曲线或参照样本，在检测低丰度变异时具有高准确性；高灵敏度和特异性使其适合追踪微小残留疾病；操作简便且易于自动化，提高检测效率并降低操作误差。

检测策略

2022年《非小细胞肺癌MET临床检测中国专家共识》1指出：目前FISH法及NGS法均可以用来检测MET基因扩增；FISH检测MET扩增是当前检测的金标准，使用NGS法检测MET基因扩增判读尚无统一标准；必要时需要使用FISH进行复测。ddPCR作为一种新兴技术，尽管在MET扩增检测中显示出潜力，但其临床应用尚需更多的研究来确定其准确性和可靠性。综合考虑，MET扩增的检测策略应基于临床需求和可用资源，选择最合适的方法。

MET基因扩增样本类型的选择

在NSCLC的MET基因扩增检测中，样本类型的选择是确保检测结果准确性的基础。在以往的研究中，大多数研究者倾向于使用组织样本（如肿瘤组织活检样本）来进行MET基因扩增的检测，然而，特泊替尼的INSIGHT 2研究在样本类型的选择上采取了更为全面的方法：不仅包括了传统的组织样本，还纳入了血液样本进行MET基因扩增的检测。INSIGHT 2研究2纳入组织和血液样本筛选出的MET基因扩增阳性患者，提示基于组织（TBx）的FISH检测和基于液体活检（LBx）的NGS检测方法均能有效筛选出MET扩增的患者群体（图1）。



图1 INSIGHT 2研究次要终点

2022年《非小细胞肺癌MET临床检测中国专家共识》1中提出：现阶段血液二代测序检测MET基因扩增仍存在挑战，需要进一步的优化验证，应优先采用组织样本进行检测。若受限于样本进行血液检测时，检测阴性不能排除MET基因扩增，必要时考虑二次活检FISH复测。《NCCN临床实践指南：非小细胞肺癌（2024.V2）》3对MET基因检测推荐进一步升级：通过活检和/或血浆检测，完成EGFR、KRAS、ALK、ROS1、BRAF、NTRK1/2/3、MET、RET和ERBB2(HER2)的基因分型；同时或依次进行组织和血浆检测都是可以接受的。

当前MET基因扩增检测面临的挑战

在NSCLC精准医疗的前沿，作为重要的生物标志物，MET基因扩增的检测面临着复杂而紧迫的挑战。首先，MET基因扩增阳性的界定在现有检测平台上尚未形成全球统一标准，无论是传统的金标准FISH技术，还是高通量的NGS技术，其判读差异与主观性问题阻碍了检测结果的标准化与互认。其次，尽管组织样本的检测方法展现出较高一致性，血液中循环肿瘤DNA（ctDNA）的NGS检测在MET基因扩增识别上敏感性不足，成为制约临床应用的关键瓶颈。

（一）MET基因扩增阳性的定义各平台不同，尚未统一标准

尽管FISH被视为检测MET基因扩增的金标准，其应用的判读准则（如Cappuzzo、UCCC标准）已较为成熟，但仍缺乏全球统一的执行标准。此外，FISH的主观性较高，依赖人工判读，增加了结果的变异性。而NGS技术虽然提供了多基因并行检测的能力，减少了人工干预，但不同实验室和商业检测在NGS panel设计、数据分析策略及MET基因扩增cut-off值设定上存在差异，进一步加剧了检测结果的不一致性。

一项MET基因扩增的大型荟萃分析显示4：当前临床试验中MET基因扩增的定义各不相同，MET/CEP7的比值范围从≥1.8到≥3.0（图2）。


图3  在临床试验中使用的FISH或NGS的MET基因扩增定义

2022年《非小细胞肺癌MET临床检测中国专家共识》1推荐：当MET/CEP7≥2时，判断为局部扩增；当MET GCN≥5且MET/CEP7<2时，判断为多体（染色体数目增加）。《NCCN临床实践指南：非小细胞肺癌（2024.V4）》 5提示，NGS检测到拷贝数≥10的MET基因扩增，被认为是MET高水平扩增。而特泊替尼的INSIGHT 2 研究2采用的阈值是：TBx FISH（GCN ≥5 和/或 MET/CEP7≥2）和/或LBx NGS（≥2.3 Archer)。

（二）组织NGS与FISH检测总体一致性较好，但ctDNA  NGS在MET基因扩增检测方面的敏感性仍需进一步优化和提高

一项评估 NGS与FISH在中国NSCLC患者中MET基因扩增检测一致性的研究6显示，组织NGS与FISH检测总体一致性为83.6%（56/67）。与FISH相比，组织NGS在MET基因扩增检测中的敏感性和特异性分别为66.7%（14/21）和91.3%（42/46）。而ctDNA NGS检测与FISH相比，在 MET 扩 增 检 测 中 的 敏 感 性 为 14.3% (3/21 ， 三 者 均 为 MET 局 部 扩 增 ) ， 特 异 性 为 100.0%（46/46）。 这一结果表明，与FISH相比，组织NGS在MET基因扩增检测方面显示出了良好的一致性，灵敏度达70%左右，特异性达90%，而ctDNA NGS尽管具有较高的特异性，但其敏感性低于FISH，这意味着ctDNA NGS可能会漏检一部分MET基因扩增的患者。

因此，未来的研究需要进一步优化ctDNA NGS的检测技术，探索其在不同临床场景下的应用，并与组织样本检测方法进行比较，以确定ctDNA NGS在MET基因扩增检测中的最佳应用策略。通过这些努力，ctDNA NGS有望成为NSCLC患者管理中的一个重要工具，为实现精准医疗提供支持。

结语

在NSCLC的精准治疗中，MET基因扩增的检测具有至关重要的作用。随着对MET基因扩增机制的深入研究，靶向药物如特泊替尼等小分子抑制剂的开发为患者提供了新的治疗选择。然而，MET基因扩增的检测方法多样，包括FISH、NGS和ddPCR等，它们各有优势但也面临挑战。目前，FISH作为检测的金标准，其判读准则已较为成熟，但缺乏全球统一的执行标准。NGS技术虽然减少了人工干预，但不同实验室和商业检测在设计和分析策略上的差异导致检测结果的不一致性。ddPCR在MET扩增检测中显示出潜力，但其临床应用前仍需进一步优化和验证。此外，ctDNA NGS检测在MET基因扩增识别上的敏感性不足，需要进一步优化。未来，随着技术的不断发展和临床研究的深入，我们期待更多创新的检测方法应用于临床，助力实现NSCLC患者的精准治疗。

参考文献：

[1] 中华医学会病理学分会, 等. 中华病理学杂志, 2022, 51(11) : 1094-1103.

[2] Abstract 902. 2023 ASCO

[3] NCCN临床实践指南：非小细胞肺癌（2024.V2）

[4] Chan Xiang, et al. Inc 2024 Apr;37(4):100451

[5] NCCN临床实践指南：非小细胞肺癌（2024.V4）

[6] Lin X, Zheng Q, Qi W, et al. 2023 WCLC, P1.22-11.

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